1，4-苯醌致人胚肺成纤维细胞的凋亡效应与调控机制

doi:10.3969/j.issn.1004-616x.2012.01.002

›› 2012, Vol. 24 ›› Issue (1): 6-9.doi: 10.3969/j.issn.1004-616x.2012.01.002

1，4-苯醌致人胚肺成纤维细胞的凋亡效应与调控机制

熊梦祯，张娟，孙蓉丽，尹立红，浦跃朴

东南大学公共卫生学院环境医学工程教育部重点实验室，江苏南京 210009

收稿日期:2011-06-13 修回日期:2011-07-14 出版日期:2012-01-30 发布日期:2012-01-30
通讯作者: 浦跃朴

Apoptotic effect and regulatory mechanism of 1, 4-benzoquinone on HELF cells

XIONG Meng-zhen，ZHANG Juan，SUN Rong-li，YIN Li-hong，PU Yue-pu

Key Laboratory of Environmental Medicine Engineering, Ministry of Education, School of Public Health，Southeast University, Nanjing Jiangsu 210009, China

Received:2011-06-13 Revised:2011-07-14 Online:2012-01-30 Published:2012-01-30
Contact: PU Yue-pu

摘要/Abstract

摘要： 目的：研究1，4-苯醌 (1，4-benzoquinone，PBQ ) 对人胚肺成纤维细胞(human embryonic lung fibroblast，HELF)的凋亡效应与调控机制。方法：分别用不同浓度(10、20、40、60、80 μmol/L)的PBQ处理HELF细胞24 h和40 μmol/L PBQ处理HELF细胞24 、48、72 h后，应用噻唑蓝(MTT)比色法检测PBQ对HELF细胞增殖的抑制作用，以PI单染法检测细胞周期的改变，用Annexin-Ⅴ/PI双染法检测细胞凋亡，以实时荧光PCR法检测Bax、Bcl-2、p53 mRNA表达水平的改变。结果：与对照组相比，不同PBQ染毒浓度下作用24 h后，随PBQ浓度增加，细胞相对增殖率显著下降 (P<0.05)，G0/G1期细胞下降(在40和60 μmol/L时， P <0.05)，S期细胞增加 (P <0.05)，以40 μmol/L PBQ浓度作用于HELF细胞不同时间，随着染毒时间的增加其相对增殖率和S期细胞均下降 (P<0.05)，而G0/G1期细胞随着染毒时间的增加呈上升趋势(P<0.05)；当染毒浓度大于20 μmol/L时，染毒24 h可诱导HELF细胞产生凋亡，凋亡率随着染毒时间的增加而上升，与对照组相比差异具有统计学意义 (P <0.05)；不同浓度的PBQ染毒24 h，细胞的Bax、Bcl-2、p53 mRNA表达水平均上调。40 μmol/L PBQ作用不同时间后，Bax、p53 mRNA水平随着染毒时间的增加而上升，与对照组相比差异均具有统计学意义 (P均 <0.05)；Bcl-2随染毒时间增加而下降，48和72 h时与对照组相比差异具有统计学意义 (P <0.05)；Bax/Bcl-2比值随染毒时间增加而增加，与对照组相比差异具有统计学意义 (P <0.05)。结论：PBQ能抑制HELF细胞增殖，影响HELF细胞周期分布，诱导细胞发生凋亡，其凋亡机制可能与Bax/Bcl-2比值的上升，及p53 mRNA表达的上调有关。

关键词: 4-苯醌, HELF细胞, 细胞凋亡, Bax/Bcl-2, p53

Abstract: OBJECTIVE: To study the apoptotic effect and regulation of 1，4-benzoquinone(PBQ) on human embryonic lung fibroblast (HELF)， cells. METHODS：MTT assay was used to detect the relative growth rate (RGR)，cell cycle was determined by single-stained assay with PI and apoptosis was determined by double-stained assay with Annexin-Ⅴand PI using flow cytometry. Bax，Bcl-2，p53 mRNA levels were determined with real-time PCR. RESULTS：The RGRs of HELF cells exposed to different PBQ concentrations after 24 h decreased (P < 0.05)，cell cycle distribution was changed at 40 and 60 μmol/L after 24 h (P <0.05). The RGRs of HELF cells exposed to 40 μmol/L PBQ after different times decreased (P <0.05)，the rates of G0/G1 phase increased with time (P < 0.05). Apoptosis was induced with PBQ higher than 20μmol/L，and increased with PBQ concentration (P < 0.05). The relative expression levels of Bax，Bcl-2，p53 increased with concentration after exposure for 24 h (P < 0.05). The relative expression levels of Bax and p53 exposed at 40μmol/L increased with time (P < 0.05)，while bcl-2 decreased with time (P < 0.05)，with Bax/Bcl-2 ratio increased with time (P < 0.05). CONCLUSION：PBQ was able to change cell cycle distribution of HELF cells，and induce apoptosis，with dose-response and time-response effects. The up-regulation of mRNA expression level of p53 and the elevated Bax/Bcl-2 ratio may be the mechanisms for apoptosis of HELF cells after PBQ exposure.

Key words: 4-benzoquinone, HELF cell, cell apoptosis, Bax/Bcl-2, p53

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1，4-苯醌致人胚肺成纤维细胞的凋亡效应与调控机制

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